Yksi molekyylibiologian perusteellisimmista tekniikoista proteiinipalvelun tutkimiseksi on molekyylikloonaus. Tässä tekniikassa mielenkiinnon kohteena olevaa proteiinia koodaava DNA kloonataan käyttämällä polymeraasiketjureaktiota( PCR) ja / tai rajoittavia entsyymejä plasmidiin (ekspressiovektori). Vektorilla on 3 erottuvaa piirrettä: replikaation aloituskohta, monikertainen kloonauskohta( MCS) ja selektiivinen merkki, tavallisesti antibioottiresistenssi. Moninkertaisesta kloonauskohdasta ylävirtaan sijaitsevat promoottorialueet ja kopioinnin aloituskohta, jotka säätelevät kloonatun geenin ilmentymisen muotoa. Tämä plasmidi voidaan insertoida joko bakteeri- tai eläinsoluihin. Käyttöön DNA bakteerisoluihin voidaan tehdä muutos kautta ottoa paljain DNA, conjugation solu-kontaktikontaktion kautta tai transduktiolla virusvektorin kautta. Käyttöön DNA eukaryoottisiin soluihin, kuten on esitetty eläinsolut, fysikaalisin tai kemiallisin keinoin kutsutaan transfection. Käytettävissä on useita samanlaisia transfection tekniikoita, kuten kalsiumfosfaatti transfection, elektroporaatio, mikroinjektiot ja liposomi transfection osoittavat. Plasmidi voi olla integroitunut genomiin, jolloin saadaan stabiili transfection, tai se voi pysyä riippumattomana genomista, kutsutaan ohimeneväksi transfection .
Kuva 095A | Kaavamainen suhde biokemian, genetiikan ja molekyylibiologian välillä Koneella luettavaa kirjailijaa ei toimitettu. OldakQuill oletettu (perustuu tekijänoikeusvaatimuksiin). (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Schematic_relationship_between_biochemistry,_genetics_and_molecular_biology.svg), "Biokemian, genetiikan ja molekyylibiologian kaavamainen suhde", https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/ laillinen koodi Wikimedia Commonsista
Kirjailija : Yavor Mendel
Kommentit
Lähetä kommentti